Efeitos das espécies hospedeiras na composição da microbiota em flebotomíneos Phlebotomus e Lutzomyia

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Dec 21, 2023

Efeitos das espécies hospedeiras na composição da microbiota em flebotomíneos Phlebotomus e Lutzomyia

Parasitas e Vetores volume 16, Número do artigo: 310 (2023) Citar este artigo Detalhes das métricas Os flebotomíneos sugadores de sangue são vetores dos parasitas protozoários Leishmania spp. Apesar de

Parasitas e Vetores volume 16, Número do artigo: 310 (2023) Citar este artigo

Detalhes das métricas

Os flebotomíneos sugadores de sangue são vetores dos parasitas protozoários Leishmania spp. Embora a microbiota intestinal esteja envolvida em uma ampla gama de processos biológicos e fisiológicos e tenha o potencial de alterar a competência vetorial, pouco se sabe sobre os fatores que modificam a composição da microbiota intestinal dos flebotomíneos. Como um passo fundamental para resolver esta questão, investigamos o impacto das espécies hospedeiras na composição bacteriana intestinal em flebotomíneos Phlebotomus e Lutzomyia criados nas mesmas condições.

A amplificação do gene 16S rRNA bacteriano e o sequenciamento Illumina MiSeq foram usados ​​para caracterizar a composição bacteriana geral de três flebotomíneos criados em laboratório: Phlebotomus papatasi, Ph.

Nossos resultados mostraram que as larvas das três espécies de flebotomíneos abrigavam quase os mesmos micróbios, mas tinham abundâncias relativas diferentes. adultos Ph. papatasi e Ph. duboscqi revelaram composições de microbiomas semelhantes, que eram distintas daquelas de Lu adulto. longipalpis. Além disso, mostramos que Ph. papatasi e Ph. duboscqi são hospedeiros de diferentes gêneros bacterianos. O experimento foi repetido duas vezes para melhorar a precisão e aumentar a confiabilidade dos dados, e os mesmos resultados foram obtidos mesmo quando uma composição distinta do microbioma entre a mesma espécie foi identificada, provavelmente devido ao uso de diferentes lotes de alimento para larvas.

O presente estudo fornece informações importantes sobre o papel das espécies hospedeiras no conteúdo microbiano intestinal de diferentes espécies de flebotomíneos criadas nas mesmas condições, o que pode influenciar sua suscetibilidade à infecção por Leishmania.

Os flebotomíneos (Diptera: Psychodidae) são insetos hematófagos que se alimentam de uma ampla gama de hospedeiros e transmitem uma vasta gama de patógenos responsáveis ​​por causar doenças em humanos e animais em todo o mundo. Entre as mais de 1.000 espécies de flebotomíneos validadas até o momento, apenas 10% são vetores conhecidos ou suspeitos de diferentes patógenos, incluindo arbovírus e bactérias, mas são bem reconhecidos como os principais vetores da Leishmania, o agente causador da leishmaniose, uma doença tropical negligenciada [1, 2].

Os flebotomíneos vivem em grupos e interagem com diversas microbiotas. Foi demonstrado que os simbiontes microbianos influenciam aspectos-chave da aptidão do seu inseto hospedeiro [3,4,5,6]. De acordo com um estudo anterior, as moscas Lutzomyia longipalpis alimentadas com uma dieta contendo fezes de coelho eram mais propensas a botar ovos do que as moscas alimentadas com fezes esterilizadas no estágio de larva [3]. Além disso, foram observados atrasos na eclosão e menores taxas de sobrevivência em larvas alimentadas com fezes estéreis. A reintrodução de bactérias eliminadas confirmou os achados iniciais, sugerindo a importância da presença e especificidade bacteriana para o desenvolvimento do flebotomíneo. Bactérias pertencentes ao filo Proteobacteria participam da nutrição do hospedeiro do inseto, fixando o nitrogênio atmosférico [7]. Por outro lado, o hospedeiro também pode controlar a composição microbiana até certo ponto, alterando a disponibilidade de nutrientes através da escolha da dieta, do metabolismo do hospedeiro [8] ou desencadeando fatores imunológicos [9]. Foi demonstrado neste contexto que flebotomíneos de regiões tropicais, incluindo Lu. longipalpis aparentemente criado em solo enriquecido com folhas decompostas e outros detritos, com preferência por bases de árvores. Além disso, os insetos tendem a desenvolver respostas imunológicas para manter um equilíbrio complexo entre aceitação e rejeição, mantendo assim uma coexistência pacífica [9].

A microbiota intestinal natural é adquirida por flebotomíneos adultos de várias fontes, incluindo plantas de cana-de-açúcar e sangue de uma ampla variedade de hospedeiros ou da recolonização do intestino por micróbios ingeridos por estágios larvais terrestres [3, 10,11,12 ,13]. A maioria das bactérias em estágio larval sofre biodegradação durante o estágio de pupa, e a carga microbiana é imediata e significativamente reduzida após a emergência do adulto [14, 15]. Os flebotomíneos fêmeas são infectados pela ingestão de células infectadas durante as refeições de sangue e criam uma relação interativa entre a comunidade microbiana do intestino e o parasita, porque o ciclo de vida de desenvolvimento da Leishmania dentro do vetor flebotomíneo ocorre exclusivamente no intestino médio e posterior no intestino. presença de bactérias simbióticas [16, 17]. A comunidade bacteriana intestinal em flebotomíneos pode exercer um efeito negativo ou positivo no desenvolvimento de Leishmania, dependendo da espécie bacteriana [14, 17,18,19,20,21]. Estudos adicionais sobre a ligação entre bactérias depositadas durante picadas de flebotomíneos infectados por Leishmania e os resultados clínicos da leishmaniose sugeriram que os micróbios intestinais de Lu. longipalpis são egestados na pele do hospedeiro, além de Leishmania, desencadeando infiltração de neutrófilos e facilitando a instalação do parasita [22]. De acordo com estudos anteriores, foi dada especial atenção às interações que ocorrem entre a comunidade microbiana do intestino do flebotomíneo e os parasitas, e um conjunto de microbiota simbiótica foi considerado como um candidato potencial para abordagens paratransgênicas ou biológicas para o controle do flebotomíneo. populações [9, 11]. Estudos anteriores mostraram que variações na microbiota intestinal dos insetos podem ser expressas por muitos fatores, incluindo habitat do hospedeiro, dieta, estágio de desenvolvimento e filogenia, todos os quais contribuem para a composição da microbiota intestinal dos insetos [23,24,25,26 ,27,28]. No entanto, pouco se sabe sobre os fatores genéticos do hospedeiro que modificam a composição da microbiota intestinal dos flebotomíneos e, até onde sabemos, nenhuma pesquisa foi conduzida sobre esses insetos sob condições controladas.

5 years under the same laboratory conditions to minimize the potential influence of environmental factors and diet. In the laboratory, the sand flies were maintained in net cages (30 × 30 × 30 cm) at 26 ± 1 °C, 80–90% humidity, and a 12:12 (light: dark) photoperiod. The sand flies had access to a piece of cotton soaked in 30% sucrose solution. Non-blood-fed females were exposed to BALB/c mice (Japan SLC, Shizuoka, Japan) as the blood source. The blood-fed females were transferred individually to vials for oviposition. Eggs were placed in a 150-ml polystyrene container filled with 2 cm of plaster of Paris at its bottom (oviposition container) and were kept in the dark at 26 ± 1 °C, 80–90% humidity. Just before hatching, a very small amount of food was sprinkled on several spots near the eggs. Larval food was prepared by mixing fresh rabbit feces and rabbit chow in a 1:1 ratio, which was fermented at 26 °C for 4 weeks in a dark chamber, air dried, and ground to a powder [30]. Notably, two different food batches were prepared separately at two time different intervals, which may have caused change in bacterial communities./p> 5 years under the same conditions, and it was therefore thought that other variables, such as diet, temperature, and humidity, would not strongly affect the microbiome. Notably, females of Ph. papatasi and Ph. duboscqi are Old World species that are morphologically and genetically closely related, and both are known to be vectors of L. major [42]. In contrast, Lu. longipalpis is a New World species and natural vector of Leishmania infantum parasites. The separation between primitive Phlebotomus and Lutzomyia occurred approximately 200 million years ago [43]./p> 57% and 47% of the identified bacteria belonged to the Proteobacteria phylum in New and Old World sand fly species, respectively [47]. The distinct composition of the bacterial communities of Ph. papatasi and Ph. duboscqi was driven by two ASVs belonging to Rhizobiaceae and Yersiniaceae (genus Serratia). However, Lu. longipalpis was characterized by a specific bacterial structure dominated by Achromobacter, Tsukamurella, Staphylococcus, and Stenotrophomonas. Further studies are required to investigate the contributions of different bacterial taxa to the life traits of sand fly species, considering the contrasting evidence for the role of endosymbiotic bacteria in the infectivity and survival of Leishmania [14, 17]./p>